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糖尿病模型（DM）是胰島素抵抗和胰島素缺乏導(dǎo)致的以高血糖為主要特征表現(xiàn)的代謝紊亂綜合征，易發(fā)生心、腦、腎等并發(fā)癥。糖尿病狀態(tài)下血漿游離脂肪酸異常增高，心肌耗能增加，葡萄糖代謝下降，脂肪酸代謝增加，心臟內(nèi)過(guò)量的脂肪酸攝取和氧化導(dǎo)致心肌內(nèi)脂肪代謝產(chǎn)物的積聚引起心臟脂質(zhì)毒性，并在此基袖上出現(xiàn)氧化應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡、內(nèi)皮功能紊亂、炎癥反應(yīng)增加，同時(shí)出現(xiàn)心肌的損傷，心肌的結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生改變，最后導(dǎo)致糖尿病患者的死亡。

Ⅱ型小鼠造模及治療方案

動(dòng)物選取

SPF級(jí)Balb/C小鼠，雄性，周齡為4w~6w，體重為18g~20g。
經(jīng)驗(yàn)：先適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，體內(nèi)外環(huán)境適應(yīng)，一周后體重體重水平20-24g.

高脂喂養(yǎng)
高脂喂養(yǎng)4-6周，體重達(dá)到32g以上。

高脂飼料

BJBAG1035DM (日糧型）,BJBAG12451M（純化型），同時(shí)設(shè)立空白組。

預(yù)試驗(yàn)階段

1.預(yù)實(shí)驗(yàn)分組：

造模梯度試驗(yàn)分3組（例如：120mg/kg, 110mg/kg，100mg/kg)。

備注：預(yù)試劑量值選取，和批次體重水平相關(guān)。體重水平高，應(yīng)調(diào)低單位給藥量水平，不同品系和重量水平的給藥推薦可以咨詢我公司技術(shù)客服。

2.治療份組：對(duì)照組（模型組）、陽(yáng)性藥組、受試藥組（三個(gè)濃度）。

3.組只要求：建議每組10-15只動(dòng)物。
  備注：統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，組只10只以上，具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4. 實(shí)驗(yàn)周期：適應(yīng)性喂養(yǎng)1w+模型判定2w+治療（4-12w)+取材

STZ注射及緩沖液配置

5. 檸檬酸鈉緩沖液配制：將2.10 g檸檬酸加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸母液， 稱為A液； 將2.94g檸檬酸三鈉加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸鈉母液，稱為B液； 將A、B液按1:1比例（或1：1.32）混合，pH計(jì)測(cè)定pH值，調(diào)定溶液pH=4-4.4之間，即是所需配制STZ的0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液。

6. STZ溶液的配制：按1%稀釋STZ, 即10mgSTZ:1mlSTZ，并用0.22μm濾菌器過(guò)濾除菌。現(xiàn)用現(xiàn)配。

正式造模

7.空腹12h,建議隔夜禁食；

8. 模型組小鼠按照預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索的劑量注射STZ， 腹腔注射或靜脈注射。

9. STZ注射3d后，測(cè)空腹血糖，選擇血糖高于16. 7 mmol/L納入正式實(shí)驗(yàn)。

10. 治療（藥物干預(yù)）階段，設(shè)立對(duì)照組，對(duì)照組應(yīng)同步注射藥物稀釋液，每周測(cè)血糖、體重，觀察體重血糖變化。

取材階段

11.治療結(jié)束后，根據(jù)測(cè)量值的需求，選取對(duì)應(yīng)的固定方法進(jìn)行取材。取黃脂，皮下脂肪，骨骼肌，白脂，肝臟，肺臟，心臟，腎臟用于病理和分子生物學(xué)檢測(cè)，摘眼球采血，室溫靜置2h后于4℃ 3000r離心10分鐘提取血清，放入-80冰箱凍存。

模型評(píng)價(jià)

1. 大體觀察：正常組小鼠體型適中，精神狀態(tài)良好，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)平伏有光澤。而糖尿病小鼠體重變輕，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛豎無(wú)光澤，動(dòng)作遲緩，弓背捲體，尿量顯著增加。糖尿病小鼠較正常組體重顯著減輕，心臟系數(shù)、肝臟系數(shù)較正常組有顯著增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 空腹血糖、甘油三酯和總膽固醇水平的變化：

正常對(duì)照組的空腹血糖、甘油三酯和總膽固醇水平在實(shí)驗(yàn)前后均無(wú)顯著差異；

模型組的空腹血糖、甘油三酯和總膽固醇水平顯著高于對(duì)照組，

3. 糖尿病小鼠心臟組織形態(tài)學(xué)的變化

經(jīng)HE染色可見正常對(duì)照組小鼠心肌纖維排列整齊，致密，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻，細(xì)胞外間質(zhì)較少，微血管結(jié)構(gòu)正常，可見少量成纖維細(xì)胞，間質(zhì)無(wú)明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；糖尿病模型組小鼠心肌纖維排列紊亂，心肌細(xì)胞肥大，細(xì)胞間隙增大，結(jié)構(gòu)不清晰，有的細(xì)胞核膜皺縮，核固縮，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肌細(xì)胞間也可見成纖維細(xì)胞浸潤(rùn)

4. 糖尿病小鼠肺臟組織形態(tài)學(xué)的變化

HE染色顯示，對(duì)照組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡分布均勾，肺泡隔、支氣管

壁完整，肺間質(zhì)分布均勻，少見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；DM組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，部分肺泡腔萎縮、塌陷，可見肺大泡，支氣管壁增厚，肺間質(zhì)和血管周圍細(xì)胞外基質(zhì)增多，成纖維細(xì)胞增多，并有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，

5. 糖尿病小鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)的變化

HE染色顯示，DM組小鼠腎小球肥大增生，腎小球系膜基膜增厚，腎小管空泡變性，胞質(zhì)空亮。

6. 糖尿病小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的變化

經(jīng)油紅O染色可見糖尿病小鼠肝內(nèi)脂滴較大，紅色脂滴明顯，肝臟可見顯著的脂質(zhì)沉積。